Схема производства субъединичной вакцины

1. После того, как ВОЗ определит эпидемический штамм вируса гриппа в следующем сезоне, она распространяет прототипы вируса ("первичное семя") по производителям вакцин.
2. В лабораториях каждый штамм вируса размножается на куриных эмбрионах, что служит основой для "вторичного" потомства, используемого в качестве ресурсов для индустриального производства.
3. Так как вирус типа А не очень хорошо изначально реплицируется используются методы генной инженерии. Из вируса выделаются гены, кодирующие гемагглютинин и нейраминидазу и встраиваются в генотип вируса, который хорошо размножается на куриных эмбрионах. Таким образом, рекомбинантный вирус имеет антигенные свойства, требуемые ВОЗ и превосходные репликационные свойства. Для вируса типа В такая процедура также возможна, но обычно в ней нет необходимости.
   
    
   Схема получения рекомбинантного вируса

   Новый штамм вируса гриппа, рекомендованный ВОЗ	+	Штамм вируса гриппа PR8, хорошо реплицирующий на куриных эмбрионах
   Рекомбинантный вирус

4. Каждый тип вируса получают отдельно, на разных куриных эмбрионах. Данную процедуру проводят для каждого вирусного штамма (всего их 3). После заражения яйцо инкубируется в течение 2-3 дней при температуре 33-35 градусов. Происходит размножение вируса.
5. Сто тысяч куриных эмбрионов в возрасте 10-11 дней автоматически инокулируются небольшим количеством "вторичного" вирусного потомства. Для предотвращения контаминации с бактериями происходит обработка дезинфектантами. Яйца инкубируют от 2 до3 дней при оптимальной температуре 33-35 С.
    

   

6. Затем происходит сбор материала, ультрацентрифугирование, позволяющее добиться высокой степени очистки от примесей.
7. Вирус инактивируют с помощью формальдегида.
8. Детергент Триметил-Цетил-Аммониум Бромид (TCAD) позволяет выделять гемагглютинин и нейраминидазу в самостоятельные субъединичные участки.
9. Поверхностные белки выделяются с помощью очередного ультрацентрифугирования.
10. Белки очищаются от детергента и внутренних составляющих вирусной частицы при помощи диализа.
11. Гемагглютинин и нейраминидаза спонтанно соединяются в розетки и помещаются в буферный раствор, содержащий соли калия, натрия, кальция и магния и очень незначительные количества консерванта для полной уверенности в предупреждении бактериальной контаминации.
12. Такая процедура применяется для каждого из трех вакцинных компонента - двух подтипов вируса А и подтипа вируса В. Эти компоненты комбинируются в одном шприце, содержащим 0.5 мл раствора.

Каждый год вакцина проходит жесткий контроль качества. В настоящее время существует центральная регистрационная процедура для всех новых вакцин в странах ЕС. Для обеспечения своевременного распространения вакцин, и производители, и органы регистрации находятся под жестким временным давлением.

Как только появляется первый образец новой вакцины, сразу проводятся два клинических исследования этой вакцины у молодых лиц и пациентов преклонного возраста для оценки эффективности и переносимости.